DPPH自由基清除能力检测试剂盒（可见分光光度法）
产品货号：BA
产品规格：50管/24样
产品简介：
DPPH自由基一种很稳定的氮中心的自由基，是样本抗氧化能力的重要指标之一，广泛应用于抗氧化类食品、保健品及药品的研究中。
DPPH自由基有单电子，其醇溶液呈紫色，在nm处有强吸收。当有抗氧化剂存在时，DPPH自由基被清除，其溶液颜色变浅，nm的吸光度下降，在一定范围内其吸光度的变化与自由基被清除的程度成正比。本试剂盒中，通过吸光度下降的程度来反映样本清除DPPH自由基的能力。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品组成：
溶液的配制：
1.试剂一：无水乙醇自备；
2.试剂二：粉剂置于瓶内EP管中。临用前加入6.08mL试剂一振荡溶解，用不完的试剂可于-20℃保存1个月，建议分装保存，避免反复冻融；临用前根据试验所需量按照试剂二：试剂一（V:V）=4：21的比例配制成工作液，现配现用，用不完的工作液可于2-8℃保存一周；
3.试剂三：10mg维生素C。临用前加入1mL提取液，充分振荡溶解，配成10mg/mL的维生素C溶液，2-8℃保存两周；用于阳性对照。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、恒温水浴锅、台式离心机、无水乙醇、研钵/粉碎机、烘干箱、30~50目筛和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可参考文献）
（1）植物样本的制备：将新鲜样本置于60℃烘箱烘干至恒重，研钵研碎（或粉碎机粉碎），过30~50目筛；称取约0.05g样本，加入1mL提取液后置于40℃水浴锅中浸提30min；rpm室温离心10min，取上清，置于冰上待测。（2）红酒、果汁等液体样本：吸取μL样本溶液加入μL提取液，旋涡振荡混匀，室温rpm离心10min，取上清，置冰上待测。
（3）提取物或者药物：可用提取液配制成一定浓度，如5mg/mL。
注意：不同样本清除DPPH自由基的能力可能相差很大，为保证实验结果的准确性，样本要根据预实验结果进行适当调整（如清除率大于90%，建议将提取的样本用提取液进行稀释；清除率小于5%，建议加大烘干样本质量或液体样本体积进行提取）。
二、测定步骤
1.分光光度计预热30min以上，调节波长至nm，分光光度计用无水乙醇调零。
2.阳性对照的准备：若需要线性关系，建议将10mg/mL的维生素C溶液用提取液配制成0.3、0.25、0.、0.、0.03、0.mg/mL的维生素C溶液待用，稀释可参考下表；若需要清除率约为%的阳性对照，则建议将10mg/mL维生素C溶液用提取液配制成大于0.3mg/mL的维生素C溶液待用。
备注：实验中每个标准管需25μL试剂三。
3.操作表：在1.5mLEP管中分别加入下列试剂：
三、计算公式
1.阳性对照的自由基清除率计算公式：
DPPH自由基清除率DVC%=[(A空白-A阳性对照)÷A空白]×%
2.样本的自由基清除率计算公式：
DPPH自由基清除率D%=[[A空白-(A测定-A对照)]÷A空白]×%
注意事项：
1.不同样本清除DPPH自由基的能力可能相差很大，如果要比较不同样本的DPPH自由基清除能力，建议对于同一批样本加入等量的样本，红酒、组织匀浆、果汁等液体样本加入同样体积，提取物（或者药物）配制成同样浓度。在比较时，将样本根据预实验结果进行适当调整，比较同样浓度（相同稀释倍数）的清除率大小。
2.样本建议当天提取当天检测。
实验实例：
1.称取0.05g益母草叶片加入1mL提取液进行样本处理，离心取上清后按测定步骤操作，测得A空白=1.、A对照=0.、A测定=0.，根据计算公式得：
DPPH自由基清除率D%=[[A空白-(A测定-A对照)]÷A空白]×%=86.5%。
2.取μL红酒加入μL提取液进行样本处理，离心取上清后按测定步骤操作，测得A空白=1.、A对照=0.、A测定=0.，根据计算公式得：
DPPH自由基清除率D%=[[A空白-(A测定-A对照)]÷A空白]×%=27.9%。
3.称取0.05g枸杞加入1mL提取液进行样本处理，离心取上清稀释20倍后按测定步骤操作，测得A空白=1.、A对照=0.、A测定=0.，根据计算公式得：
DPPH自由基清除率D%=[[A空白-(A测定-A对照)]÷A空白]×%=20.5%。
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